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常规标本
特殊标本
血液项目标本采集
实体瘤标本要求
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实体瘤标本要求

常规标本的采集与处理

临床化学检验中多采用血液为标本,其次为尿液,少数是其他体液(如唾液、脑脊液、胸腹水、羊水等)。标本的化学成分含量可因标本采集和处理不当等因素的影响而发生变化,从而影响测定结果的准确性,因此,在取标本时要考虑到并设法消除这些因素的影响。

 

一、血液标本

 

采血管分普通管、抗凝管和促凝管三类。常用抗凝剂有:枸橼酸钠、EDTA-K2或EDTA-Na2、肝素等。根据不同的检验项目,选用合适的采血管十分重要。

 

1.采血部位:

为保证血液检验结果的准确性,静脉采血一般选择肘前静脉或正中静脉,必要时可采用手臂静脉和踝部静脉,但要避开皮肤有病变的部位。小儿可采用颈静脉采血。此外,必要时还可从股静脉、大隐静脉、锁骨下静脉、脐旁静脉采集。

 

2.采集方法:

血糖、血脂、蛋白质、尿酸、无机离子、酶类测定,采血后注入洁净试管,室温放置1-2小时后,离心分离血清。纤维蛋白原类测定需用血浆,采血后注入盛有特定抗凝剂的试管中,并立即混匀。

 

3.采集时:

不要在患者输液、输血或静脉推注某些药物的一侧采血,避免引起某些检验数值的过高或过低,应选择对侧手臂肘前静脉采血。

 

4.注意事项:

a. 不要用错采血管。
b. 采血用针头不宜过细,以免使血K+升高。
c. 采静脉血时止血带压脉时间不宜过长,以免引起血管内溶血。
d. 抽取时产生的大量气泡不要放入试管内,以免引起溶血。
e. 不要在病人输液同侧手臂采血,更不能在病人输液时,通过前端留置针抽血。对于植入留置针的患者,因针管内充肝素抗凝,应尽量采用其他部位采血
f. 抗凝管一定要来回颠倒混匀3-5次
g. 血清标本应避免溶血,并及时分离血清,如需隔日检验,应封口后4℃保存。
h. 血气和pH值测定的血液以动脉血为原则,且不可漏气。
i. 细菌培养的样品要采用无菌技术取样,防止污染。

 

 

★ 标本采集后,必须在试管或容器上贴上检验申请单号码、病人姓名,且应当场核对无误。

 

 

二、尿液标本

分为清晨空腹尿、随机尿、计时尿(2h、3h、12h、24h等)、午后尿、餐后尿、症状典型时尿等。尿液原则上以不用防腐剂为好,如需12h或24h尿,首选以冷藏为妥,根据不同的检验目的加用合适的防腐剂。17羟、17酮、VMA检测标本必须加浓盐酸防腐。

 

三、骨髓

按骨穿要求消毒,请先用相应抗凝剂润湿针管筒至5ml刻度处后,排出多余抗凝剂及空气,再抽取骨髓,按检测要求需要的抗凝管送检。4℃保存运输。标本采集后,必须在试管或容器上贴上检验申请单号码、病人姓名,性别,年龄,是否移植,若移植提供供者性别,临床诊断,抽取骨髓时的状态(是否干抽),且应当场核对无误。

 

四、脑脊液

由临床医师穿刺采样,用专用的各种试管或容器保存,及时送检,4℃运输标本。

 

五、胸水、腹水

将抽取物装入清洁干燥的空瓶中。必要时加抗凝剂,6小时内送检。

特殊标本的采集与处理

一、血粘滞度

1. 病人准备:

病人需空腹,禁止在输液后采血。


2. 标本采集:

病人应取坐位、肘前静脉采血。


3. 类型及量:

一管肝素抗凝血4-5ml,一管枸橼酸钠(1:4)抗凝血2ml。


4. 标本保存:

血标本采集后室温下静置20分钟测定,密封容器后室温(15-25℃)保存,最长不超过4小时。

 

二、胰岛素/C肽

1. 病人准备:

实验前3日,每日食物中糖含量不低于150克,且维持正常活动,影响实验的药物(如:咖啡因、口服避孕药、水杨酸盐等)应在3日内停用,实验前病人应10-16小时不进食。


2. 标本采集:

临床上常用方法是清晨空腹取血后,再于餐后0.5、1、1.5、2小时各取血1次。


3. 类型及量:

无添加剂管、全血2ml。


4. 标本保存:

2-8℃保存。

 

三、高血压RAAS检测

1. 病人准备:

阻断剂、血管扩张剂、利尿剂及甾体激素、甘草等影响体内肾素水平,一般要在停药后2周测定PRA,利血平等代谢慢的药物应在停药3周后测定。不宜停药的病人改服胍乙啶等影响PRA较小的降压药。钠摄入量影响机体水平,故病人测定前3天应适当减少食盐摄入量,最好同时测定取血前24小时尿钠含量,以供分析结果时参考。


2. 标本采集:

肘静脉取血5ml,迅速分别注入专用抗凝管中,摇匀。


3. 类型及量:

专用抗凝管采血,分离血浆,取2ml送检。


4. 标本保存:

-20℃低温冰箱保存,可保存2个月。


5. 注意事项:


a. 抽血要求:提前向本中心领取特殊试管3ml管,保存期一周,4℃保存。卧位抽血:早晨空腹不起床或平卧2小时,抽血5 ml,取掉针头后,分别注入特殊试管3ml及肝素抗凝管2ml,轻轻摇匀,勿剧烈震荡,立即4℃保存。立位抽血:保持站立或走动2小时,抽血方法相同,即刻送检。
b. 标本未及时分离血浆、反复冻融、溶血、使用过期抗凝管等均可使结果受到影响。

 

四、性激素检查

注意事项:
a. 性激素检查无需空腹。
b. 检查前至少一月内不能用性激素类药物(包括黄体酮、雌激素类),否则结果不可靠(治疗后需复查性激素者除外)。
c. 了解基础性激素水平,要选择月经第2-5天检查,第3天测定最好。
d. 不能肯定阴道流血是否为月经者,应同时检测性激素6项,以防误诊。

 

五、染色体疾病优生筛查

注意事项:

1.申请单上务必填写孕妇年龄、体重、身高、末次月经日期、准确孕周(B超或末次月经计)、采血时间、吸烟状况、糖尿病胰岛素治疗情况、单胞或多胞胎,孕妇本人阅读筛查须知后签字,否则无法作出风险评估。
2.染色体疾病优生筛查(21三体综合征、18三体综合征、神经管缺陷) (AFP、β-HCG)在孕14-22周抽血。

 

六、高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测

1. 病人准备:

48小时内不能作阴道冲洗或使用阴道内用药物;48小时内不能有性生活;检查前不进行醋酸或碘伏涂抹;月经正常妇女,非月经期采样检查,最佳检查时间为月经来潮后10-18天。


2. 标本采集:
a. 放置阴道张开器暴露宫颈,用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去,用专用取样刷置于子宫颈口与粘膜交界处单方向旋转4-5圈。
b. 将取样刷放于专用洗脱管中,在切口处折断多余部分。
c. 拧紧盖子,送检。


3. 类型及量:

宫颈刷取物,尽量避免保存液在取样过程中漏出,否则会因标本量不够而影响检测。


4. 标本保存:

室温保存不应超过12小时,2-8℃保存不超过7天,-20℃保存不超过3个月。避免反复冻融。

 

七、液基超薄细胞学(TCT)检测

1. 病人准备:

病人在检查前三天停止性生活,检查前停止外用药,并清洗外阴部。


2. 标本采集:

采集标本应用专用采样器,如果宫颈表面粘液、血液较多者,应先用棉签轻轻擦净粘液及血液,将宫颈刷抵住宫颈口,转动5-7圈。采样后将取样刷放入保存液瓶内,在切口处折断多余的部分,再拧紧瓶盖,在瓶身上写上病人姓名,填写申请单,送检。


3. 标本类型:

宫颈脱落细胞


4. 标本送检与保存:

标本采集后应及时送检,如不能及时送检,可放入4℃冰箱内保存。


5. 注意事项:
a. 用取样器采集标本时,宫颈器前端的长毛刷应插进宫颈管以便采集到宫颈上皮及移行区上皮细胞,采样时动作应轻柔,用力适中,太大容易损伤宫颈,太小不能采集到足够用于诊断的上皮细胞。 
b. 送检单及标本瓶上应写清病人姓名,申请单应详细填写各项内容,特别是年龄、月经情况、病史摘要及临床诊断,如有特殊情况及要求请写明,以便正确诊断。

 

 

八、细菌培养标本的采集与处理

1. 病人准备:

病人在采集标本做该项目时至少停用抗生素一周以上。


2. 无菌采集:
1.下呼吸道分泌物(痰液):采集晨间第一口痰,应先反复漱口,经深呼吸数次后用力咳痰,不可吐入唾液,4℃冰箱待检。 
2.尿液(中段尿):由护理员协助采取中段尿约3ml入无菌试管中,放2-8℃冰箱保存待检。 
3.脓液:用沾有生理盐水的棉拭子沾取脓液,要尽量多取一些,然后将棉拭子倒悬在无菌试管中。 
4.血液:凡怀疑菌血症和败血症的患者,采血培养中时,应尽量在未使用抗菌素前采血,如已使用抗菌素,应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血。成人每次采血5-10ml,小儿采血2-3ml。 

**皮肤消毒严格执行以下三步法: 对碘不过敏的患者①70%酒精擦拭静脉穿刺部位30 s以上;②1%-2%碘酊作用30s或10%碘伏60s,从穿刺点向外画圈消毒,至消毒区域直径达3 cm以上;③70%酒精脱碘。对碘过敏的患者,用70%酒精消毒60 s,待酒精挥发干燥后采血。 
**培养瓶消毒程序:①70%酒精擦拭血培养瓶橡皮塞,作用60 s;②在血液注入血培养瓶之前,用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞子表面残余酒精。从抽血到接种入瓶,动作迅速,防止血液凝固。 标本运送:采血后应该立即送检,如不能立即送检,需室温保存或置35-37 ℃孵箱中,切勿冷藏。 
5.穿刺液(胸腹水、心包液、关节腔液、鞘膜积液):无菌抽取后,注入含肝素的无菌试管中,轻轻填倒试管10余次,使肝素与穿刺液混匀达到抗凝的目的。4℃冰箱内保存。
6.胆汁:医生以无菌方法取胆汁10ml注入无菌试管。
7.脑脊液:以无菌方法取脑脊液3-5 ml,置无菌试管内保温送检。(无菌试管请自备)
8.阴道、宫颈及前列腺等分泌物:由临床医师采集,收集于无菌试管内送检。

 

 

九、性病培养标本的采集与处理

1.分泌物支原体(解脲支原体)培养+药敏
支原体对干、热抵抗力差,标本采集后应尽快接种于培养基中送检,室温可保存8小时;4℃可保存24小时。
男性:用特别细的无菌拭子沾取无菌盐水少许,深入尿道口内2-2.5cm处取分泌物,采集标本后马上把拭子插入培养基中送检。
女性:用沾取少许无菌生理盐水的棉拭子取宫颈管内口1-2cm单层柱状上皮细胞,取样拭子不可碰阴道壁,采集标本后马上把拭子插入培养基中送检。


2.分泌物衣原体检测:
男性患者将拭子插入尿道2-4cm,旋转3-5秒钟后取出,将取样的拭子放入无菌试管中送检。 
女性患者在取样前先用另外的拭子或棉球将宫颈口外的粘液抹去,再将取样拭子插入宫颈管内至棉花部分全部插入,旋转15-20秒取出,不要碰到宫颈外及阴道壁,将取样后的拭子放入无菌试管中送检。
标本保存条件:标本采集后在2-8℃保存,24小时内送检。


3.淋球菌培养+药敏:
*男性尿道炎急性期患者可用沾有少许生理盐水的无菌拭子取脓性分泌物。非急性期病人,可用无菌细小棉拭子沾取少许生理盐水轻轻插入尿道2-4cm深处,转动拭子,然后取出。 
*女性患者先用无菌棉拭子擦去宫颈口分泌物,再用另一沾有生理盐水的棉拭子插入宫颈口内1cm处旋转,取出分泌物。
采集标本后马上把棉拭子插入淋球菌运输培养基中送检。
标本保存条件:培养基常温下不超过24小时送检。


4.念珠菌培养+药敏:
病人准备:病人在采集标本前至少停用药物一周以上。
标本类型:生殖器分泌物。
标本采集:怀疑阴道念珠菌感染需要做培养及做药敏试验的患者,可用沾有生理盐水的棉拭子沾取大量豆腐渣样白带或可疑白带倒置于无菌试管中送检。

 

★微生物类检测及需特殊试管的检测,请提前通知我中心,以便及时提供相应专用管,尽早送检。

 

 

十、常规细胞学检查

请详尽填写常规细胞学检查申请单或专用细胞学申请单。
1.胸腹水及心包积液送检标本应加3.8%的枸橼酸钠(按1:10比例)抗凝,夏天应用10%福尔马林或95%酒精(按1:10比例)防腐,标本量应在100-200ml为宜。
2.痰液及尿液送检:痰液应留清晨第一次从肺部深咳的新鲜痰液,避免混入过多唾液、鼻腔分泌物、食物和口水,盛于清洁杯中或蜡质硬纸盒等容器内加盖送检,防止标本外溢或外漏。尿液应收集12~24小时尿量为宜,弃去上清液,留取100ml-200ml沉淀液送检,必要时加防腐剂。另外,痰液、肺泡灌洗液和尿液均可提供专用细胞保存液送检。
3.肿块穿刺标本及支气管刷片等送检:取材后,均可涂片2-4张,待自然干燥后直接送检。另外,甲状腺细胞针穿刺细胞TBS诊断,可提供专用细胞保存液送检。

 

 

十一、组织病理学检查标本的采集与处理

一般病理标本处理为:将手术标本离体后快速放入10%中性福尔马林浸泡,经过取材、脱水、石蜡包理、切片、HE染色 (苏木素-伊红染色)、阅片。病理申请单需和标本同时送检,申请单上详细填写病人信息、病史、标本数量和部位等必要信息。根据病理诊断的需要,也可选用相应的特殊染色及免疫组化。


1.内窥镜及穿刺标本
腹腔镜、支纤镜、胃镜、肠镜等活检小组织或各脏器穿刺小组织取材后需迅速放入10%的中性福尔马林溶液里固定,否则组织易失水变干而影响诊断,并注明相应位置,如:胃窦部等。


2.活检组织取材
a.选择恰当的取材部位。力求切取病变明显的组织,如为肿瘤组织,一定要带有其周围的正常组织(肿瘤的周边区可以反映邻近组织之间的界面情况),如为溃疡应取溃疡的周围及底部组织送检。 
b.采取标本时切忌挤压和烧灼,取材刀要锋利,操作要正确,以免组织过度受挤压,而导致细胞结构、形态严重变形而影响诊断,甚至造成不必要的重新取材,给病人造成不必要的痛苦,并且延长诊断时间。
c.宫颈活检取材后需注明其相应钟点位,并分别存放。
d.组织取材后需立即放入10%的中性福尔马林溶液里固定。


3.手术及全器官大组织标本
a.手术切除组织要求全部送检,并保持标本的完整性(直径超过5cm的手术标本,可剖开标本而不离断,保持标本整体结构不被破坏,有助于福尔马林浸透全部标本,否则易导致标本内部不能及时固定而变性质溶,影响诊断;如为淋巴结,则需切开后放入容器中),标本离体后需在30min内放入10%的中性福尔马林,连同病理申请单一起送检。
b.盛装标本的容器,容器入口不能太小,要保证标本不变形及能够顺利取出。容器要密封,以免固定液挥发导致浓度不足而影响固定效果。 
c.固定液要求浸泡全部组织,使组织固定充分(固定液的量应为标本的5倍以上)。中性福尔马林对组织的渗透性强,保存时间长久,固定效果好,尽量避免使用95%的酒精固定,否则会导致组织过度硬化而影响制片和病理诊断。不能用75%酒精或生理盐水,它们不能用于组织的固定。若有特殊要求,选用特殊固定液。

血液项目标本的采集与处理

一、血液肿瘤检测常规标本注意事项(PCR、流式、遗传)

1. 某些项目并不严格要求送检骨髓标本的,如由于某些原因只能送检外周血,则外周血中WBC>5×109/L;流式细胞免疫分型无此细胞数限制。
2. 初诊的患者,如怀疑为急性白血病、多发性骨髓瘤的,只要外周血中异常细胞或原始细胞达到20%以上,即可用外周血进行流式免疫分型的检测,达到30%以上,即可进行染色体核型分析及FISH相关项目的检测和融合基因相关检测;如怀疑为慢性粒细胞白血病(CML)的患者,只要外周血中有幼稚细胞出现,即可用外周血进行流式免疫分型的检测。如怀疑为慢性淋巴细胞白血病的患者,可直接用外周血进行流式免疫分型的检测。流式平台白血病微小残留的检测只能用骨髓进行(特殊情况外周血也可检测)。
3. 淋巴瘤相关项目的检测,最好用组织标本,其次用骨髓,不能用外周血送检(除非确定发生了转移)。

 

二、骨髓采集方法

1. 适用于做骨髓细胞学检测,骨髓核型检测、分子生物学检测、细胞化学染色检测的骨髓标本采集。
2. 操作步骤:
a、部位:骼前上棘穿刺点,在骼前上棘后1-2厘米。 髂前上棘穿刺点,位于骶椎两侧,臀部上方突出的部位。 胸骨穿刺点,位于胸骨柄或胸骨体相当于第1、2肋间隙位置。 腰椎棘突穿刺点,位于腰椎棘突突出处。
b、方法 :
1) 常规消毒,戴无菌手套,覆盖无菌洞巾,用2%利多卡因作局部皮肤,皮下及骨膜麻醉。 
2) 将穿刺针固定器固定在适当的长度(胸骨穿刺约1.0厘米处,髂骨穿刺约1.5厘米处)。用左手食指和中指固定在穿刺部位,以右手持针向骨面垂直刺入(胸骨穿刺则应保持针体与骨面成30°-40°角),当针尖接触骨质后则将穿刺针围绕针体长轴左右旋转,缓缓钻刺骨质,当感到阻力消失,且穿刺针已固定在骨内时,表示已进入骨髓腔。 
3) 拔出针芯,放于无菌盘内,接上干燥的10 ml或20 ml注射器(注射器筒壁应用肝素或EDTA抗凝剂润管),用适当力量抽取,即有少量红色骨髓液进入注射器中,骨髓吸取量以需要量为宜。抽出的标本移入相应抗凝管保存。 
4) 将抽取的骨髓液滴于数张载玻片上,数张分别送验有核细胞计数,形态学及细胞化学染色检查。 
5) 抽吸完毕,将针芯重新插入;左手取无菌纱布置于针孔处,右手将穿刺针连同针芯一起拔出,随即将纱布盖于针孔上,并按压1~2分钟,再用胶布固定纱布。
3. 注意事项 
a、作出凝血检查,有出血倾向者操作进应特别注意,血友病者禁忌。 
b、穿刺针必须干燥,以免发生溶血。 
c、针头进入骨质后,避免摆动过大,以免折断;胸骨穿刺不可用力过猛,以防穿透内侧骨板。 
d、抽取液量如作细胞形态学检查不易过多。 
e、如怀疑有败血症,则于涂片后,再接上注射器抽取骨髓液1.0 ml送骨髓培养。 
f、骨髓液抽取后应立即涂片,否则会很快凝固,使涂片失败。 
g、收集标本后,必须立即送检。标本运输及实验前存放:低温条件2-8℃。

 

三、血液病融合基因定性、定量、突变送检标本

1、要求采用骨髓标本的检测项目,按常规骨髓采集方法采集骨髓2-3 ml(无菌操作),置于EDTA抗凝管(紫盖)内,迅速颠倒数次以防止标本凝固。严禁使用肝素抗凝,因其对PCR扩增有抑制,且很难在核酸提取过程中完全去除。
2、4℃冷藏保存,最好24小时内送达。
3、请填写特殊申请单,并附初步诊断、化疗史、病史、治疗史及骨髓细胞学检查、外周血常规及细胞学检查结果。
4、骨髓标本无法取得,医生希望通过外周血检查了解病情。 外周血标本要求:2-3 ml外周血,EDTA抗凝(紫头管),白细胞数>5×109/L,原始细胞或异常细胞达到20%以上。但由于骨髓中细胞总数及异常细胞数均大于外周血,此种情况下,报告结果可能不能如实反映疾病情况,报告的参考价值需要医生酌情考虑。请医生详细填写申请单,请附初步诊断、化疗史、病史、治疗史及骨髓细胞学检查、外周血常规及细胞学检查结果。
5、全血或骨髓标本如用于DNA提取检测,可4℃下短期保存;如用于RNA检测,则应在取血后尽快送达,否则RNA易于降解。
6、如遇凝血、溶血、经过高温或冷冻的标本以及采用其它方法抗凝的标本,均为不合格标本,需要重新采集;标本要求无菌、运送时注意不要贴近冰袋。

 

四、血液病流式平台相关检测项目送检标本

1、骨髓标本要求
1.1、要求采用骨髓标本的检测项目,按常规骨髓采集方法采集骨髓2-5 ml(无菌操作),置于肝素抗凝管(绿盖)或EDTA抗凝管(紫盖)内,轻轻颠倒混匀以防止标本凝固。
1.2、4℃冷藏保存,48小时内送检。
1.3、请填写特殊申请单,并附初步诊断、化疗史、病史、治疗史及骨髓细胞学检查、外周血常规及细胞学检查结果。
1.4、存在凝血、溶血、细胞计数太低(低于1×105个/ml)、经过高温或冷冻的标本以及采用其它方法抗凝的标本,均为不合格标本,需要重新采集;标本要求无菌、运送时注意不要贴近冰袋。
1.5、有骨髓形态学报告的请附报告,无报告的请附骨髓涂片(白片)。
1.6、请详细填写检测申请单,微小残留检测请附初诊时免疫分型检测结果。
2、外周血标本要求
2.1、静脉采血3-5 ml,置于肝素抗凝管(绿盖)或EDTA抗凝管(紫盖)内,轻轻颠倒混匀。
2.2、4℃冷藏保存,48小时内送检。
2.3、存在凝血、溶血、细胞计数太低(低于1×105个/ml)、经过高温或冷冻的标本以及采用其它方法抗凝的标本,均为不合格标本,需要重新采集;标本要求无菌、运送时注意不要贴近冰袋。

 

五、血液病遗传平台相关检测项目送检标本

1、骨髓标本要求
1.1、要求采用骨髓标本的检测项目,按常规骨髓采集方法采集骨髓3-5 ml(无菌操作),置于肝素抗凝管(绿盖)内,迅速颠倒数次以防止标本凝固。严禁使用EDTA抗凝。
1.2、4℃冷藏保存,最好24小时内送达,最长不超过48小时。
1.3、请填写特殊申请单,并附初步诊断、化疗史、病史、治疗史及骨髓细胞学检查、外周血常规及细胞学检查结果。
1.4、骨髓标本无法取得,医生希望通过外周血检查了解病情。 外周血标本要求:3-5 ml外周血,肝素抗凝(绿头管),白细胞数>5×109/L,原始细胞或异常细胞达到30%以上。但由于骨髓中细胞总数及异常细胞数均大于外周血,此种情况下,报告结果可能不能如实反映疾病情况,报告的参考价值需要医生酌情考虑。如果检测目的是疗效监测,用外周血标本则毫无意义。请医生详细填写申请单,请附初步诊断、化疗史、病史、治疗史及骨髓细胞学检查、外周血常规及细胞学检查结果。
1.5、如遇凝血、溶血、经过高温或冷冻的标本以及采用其它方法抗凝的标本,均为不合格标本,需要重新采集;标本要求无菌、运送时注意不要贴近冰袋。
2、外周血标本要求
2.1、静脉采血5 ml以上,置于肝素抗凝管(绿盖)内,轻轻颠倒混匀;对白细胞数没有特殊要求,但也不能低过正常范围(4.0×109/L-10.0×109/L)。
2.2、4℃冷藏保存,24小时内送检。
2.3、如遇标本高凝状态、溶血、细胞脆性强、细胞计数低、经过高温或冷冻的标本以及采用其它方法抗凝的标本,均为不合格标本,需要重新采集;标本要求无菌、运送时注意不要贴近冰袋。
2.4、请医生详细填写申请单,请附初步诊断、病史、外周血常规检测结果。

实体瘤标本的采集与处理

一、基因突变送检标本

石蜡标本

用于检测肿瘤组织的体细胞突变(somatic mutation)。为了保证石蜡标本中基因组DNA提取的成功率和正常的检测周期,请按照如下要求准备送检标本:
1. 切片厚度5-10mm,切片数量取决于肿瘤组织横切面的大小。例如:对于成人拇指盖大小面积,6~8张切片即可满足DNA提取需要;如果肿瘤组织切片的面积较小,请按比例增加切片的数量。
2. 为保证切片组织中含有足够比例的肿瘤细胞,需请病理科事先对该切面的肿瘤组织进行HE染色,确保所切层面中肿瘤组织占70%以上、且坏死组织比例少于10%。如无条件,也可以同时送检一张相邻切面的白片,由我们代为检测。
3. 切片结束后,不必进行铺片和贴片处理,直接用干净的镊子将组织切片转移至干净的1.5 ml离心管中。
4. 请尽可能在送检时请提供两管待测标本,其中一管用于检测,另一管作为备用材料。
5. 标本常温保存、运输。
6. 为保证石蜡标本DNA提取的成功率,请尽可能送检2~3年以内的石蜡标本。

 

新鲜组织标本

用于检测肿瘤组织的体细胞突变(somatic mutation)。
1. 要求新鲜肿瘤组织标本≥100mg,未坏死肿瘤组织比例在70%以上。
2. 术后首先用生理盐水洗2次组织块,然后将适当大小的肿瘤组织置于贴有标签的冻存管内,迅速冷冻,8小时内低温条件(用冰盒)送达;如无法及时运送,则必需于离体20分钟内置于液氮或-70℃冰箱保存,两周内于低温条件下送达。
3. 也可以将活检或手术切除的肿瘤组织置于10%中性福尔马林溶液中(固定时间不超过4小时),固定的组织标本可以常温保存、运输。

 

外周全血标本

外周全血用于检测患者的种系突变(germinal mutation)或个体的基因多态性(SNP)。
1. 静脉采血3-5 ml,置于EDTA抗凝管(紫盖)内,轻轻颠倒混匀。
2. 必须注意抗凝剂的选择,一般使用EDTA-Na2、草酸钾或枸椽酸钠,严禁使用肝素,因其对PCR扩增有抑制,且很难在核酸提取过程中完全去除。
3. 4℃冷藏保存,24小时内送达。
4. 如果外周全血采集后不能及时送达,最好不要直接冻存于-20℃。建议制备成外周血单个核细胞(PBMC),主要有两条途径,一是使用淋巴细胞分离液分离制备;二是使用红细胞裂解液,裂解全血中的红细胞,经生理盐水数次洗涤,即可在管底得到单个核细胞。这种外周血单个核细胞如暂不提取核酸,可较长期地保存于-20℃冰箱。

 

血浆标本

血浆标本主要用于血浆肿瘤游离DNA检测。
1. 静脉采血3-5 ml(无菌操作),置于EDTA抗凝管(紫盖)内,室温静止30分钟,3000 rpm离心10分钟,取上清于干净的离心管中。
2. 4℃冷藏保存,24小时内送达。
3. 如不能及时送达,血浆标本可在-20℃下短期(1~2周)保存,较长期保存应在-70℃下;注意避免反复冻融的剪切力破坏DNA,冻存的血浆标本在日后送检时需要尽可能地在低温条件下(用冰盒)送达。
4. 如无条件离心时,也可以等同于外周全血送检要求,置于EDTA抗凝管内4小时内尽快送达,由我们代为分离血浆。

 

体液(胸水)标本

对于恶性肿瘤患者的体液标本(例如肺癌患者的恶性胸水),在离心获得其中的肿瘤细胞之后,其中大部分为肿瘤组织来源的脱落细胞,可以用于检测肿瘤组织中的体细胞突变。这对于一些术后复发或晚期转移、没有手术机会的肿瘤患者具有非常重要的意义。
1. 常规胸腔穿刺抽取胸水等体液标本后,轻轻注入收集容器中,穿刺术后静置2小时,取靠近容器底部的胸水10~15 ml,置于密闭的离心管或玻璃瓶中。
2. 4℃冷藏保存,24小时内送达。

 

二、FISH检测送检标本

新鲜组织

1.组织需用中性福尔马林固定,常温保存,标本固定时间不超过4天。如果固定时间超过4天,我们会要求送检单位签署一份试做申请或重新送样。
2.送检组织应是癌组织,我们会通过HE染色对送检标本进行质检,若送检标本出现无癌细胞、癌细胞小于计数量或者癌细胞大量坏死的情况,我们会通知送检医院,由送检医院决定是否重新送样或进行退检处理。
3.标本置于中性福尔马林固定液中,常温48小时之内送达。

 

石蜡块

1.送检医院病理科需采用中性福尔马林固定组织,且标本固定时间不超过4天。如果固定时间超过4天,我们会要求送检单位签署一份试做申请或重新送样。
2.送检蜡块应是癌组织蜡块,我们会通过HE染色对送检标本进行质检,若送检标本出现无癌细胞、癌细胞小于计数量或者癌细胞大量坏死的情况,我们会通知送检医院,由送检医院决定是否重新送样或进行退检处理。
3.请在送检申请单上的显著位置注明固定液的种类,固定的时间,常温保存、运输。

 

石蜡切片

1.送检医院病理科需采用中性福尔马林固定组织,且标本固定时间不超过4天。如果固定时间超过4天,我们会要求送检单位签署一份试做申请或重新送样。
2.切片厚度不超过4μm,必须使用“+”片或者是免疫组化专用防脱玻片(APES玻片),因为普通白片在检测的过程中可能出现脱片现象,导致FISH检测的失败。如果送检的切片为普通白片,我们会要求送检单位签署一份试做申请。
3.1p/19q FISH检测要求6张“+”片,1张白片;其他的实体瘤FISH检测项目要求4张“+”片,1张白片。
4.送检组织应是癌组织,我们会通过HE染色对送检标本进行质检,若送检标本出现无癌细胞、癌细胞小于计数量或者癌细胞大量坏死的情况,我们会通知送检医院,由送检医院决定是否重新送样或进行退检处理。
5.请在送检申请单上的显著位置固定液的种类,固定的时间,切片的厚度。
6.将切片稳妥放置于专业的切片盒内,常温保存、运输。

 

尿液

1.送检标本为新鲜尿液,不少于200 ml,取出后与保存液按如下比例混合:尿液:保存液* = 2:1(V/V),常温保存。
2.若在检测过程中发现送所尿液中的脱落细胞过少,无法达到计数要求,我们会通知送检医院,由送检医院决定是否重新送样或进行退检处理。
3.标本常温保存、72小时之内送达。

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